我国神经免疫疾病实验室诊断行业标准即将出台

互推小编 2023-09-22

神经免疫疾病包括多发性硬化、视神经脊髓炎谱系疾病、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）抗体相关疾病、自身免疫性脑炎、重症肌无力和吉兰巴利综合征等，是青壮年致残首位疾患。这组疾病的诊断、进展和疗效判别很大程度上依赖于实验室跟踪在外周或者中枢神经系统内的免疫反应，即检测自身抗体或者抗原的含量。我国神经免疫疾病诊断试剂长期被欧蒙为首的欧美公司垄断，存在试剂供应不稳定和价格昂贵等弊端。同时，在实验室结果与临床不符合的情况下，这些欧美企业无法提供与送检医生的交流，不能及时解决诊治的困惑。更为严峻的问题是，行业内缺少神经免疫疾病治疗所需的免疫反应送检内容和结果判读等行业标准。

针对以上问题，中华医学会神经病学分会神经免疫学组第三次工作及学术会议于2021年12月4日在北京召开，全国39个学组成员，10余名学组顾问参会，并进行了全国直播。北京大学第一医院郝洪军教授（图1A）首先介绍了中枢神经系统免疫反应的特征，新的认识及临床意义。接下来神经免疫学组组长施福东教授（图1B）传达了十九届六中全会“立足新发展阶段、贯彻新发展理念、构建新发展格局、推动高质量发展，推进科技自立自强”的国家战略，接着回顾和提出突破自主研发试剂的关键技术、实现神免疾病抗体检测标准化、流程化迫在眉睫。施教授介绍了基于京津神经免疫中心的天海新域-金域联合实验室针对以上关键问题的方案，包括优化中枢四项（MBP、MOG、AQP4和GFAP抗体）、自身免疫性脑炎和重症肌无力试验诊断方法等。施教授指出，基于细胞转染的CBA（Cell based assay）法是目前国际推荐的自身抗体检测方法。但是CBA检测体系也存在内源性技术问题，李治国博士将进一步阐述京津神免中心和科研转化承载的天海新域公司CBA检测法技术升级相关举措。

针对重症肌无力自身抗体的检测，河南省医药科学研究院高峰教授（图1C）首先介绍了重症肌无力抗体检测目前现状，并进一步提出：1）自身抗体检测方法学对于重症肌无力检测结果有着重要的影响，不同实验室方法学一致性评价应尽早开展（室间评价），有必要在充分讨论基础上，形成《重症肌无力诊断性自身抗体检测临床应用专家共识》；2）CBA方法检测MG自身抗体的敏感性和特异性均高于ELISA和放免（RIPA）法，在条件允许范围内推荐使用此方法，以提高抗体检出率。京津神经免疫中心李治国博士（图1D）以重症肌无力为例讲述了自身抗体实验诊断技术进展以及AChR抗体检测的技术难点，总结了京津神免中心-天海新域对CBA检测法的改进措施和技术优势。CBA检测法目前面临的问题包括试剂保存、细胞状态和转染效率难以统一、单荧光不易判定和低丰度信号不敏感等问题。针对这些问题，京津神免中心进行了CBA法技术改进，包括采用双色荧光判读体系（增加内参对照）、应用96孔板检测体系、改进试剂贮存条件和提升抗原信号稳定性等，并已形成一套生产+运输+贮存标准化质控体系。特别是对常规CBA法结果判读中出现的近15%模棱两可的样本用酪酰胺信号放大系统进行检测信号特异性放大，进一步提高了常规CBA检测的准确性，同时也形成了实验室检验和临床服务一体化体系等。同时介绍了国内外研究普遍认为ELISA法检测AChR抗体敏感性（79.5-91.5%）和特异性（96%）偏低，而放免（RIPA）法虽然有特异性（99%）优势但无法检测出Clustered AChR抗体和因放射性风险无法推广等弊端；国内外有小样本AChR抗体（小于200例）CBA法检测特异性和敏感性优于放免法的报道，但有待大样本的检测方法学比对验证。为改进重症肌无力实验室诊断技术，京津中心入组1252例重症肌无力血清样本并进行CBA-TSA、RIPA和ELISA方法学平行比对研究，证实CBA-TSA法检测AChR抗体的精准性和时效性优于RIPA法和ELISA法。目前正在筹备全国重症肌无力自身抗体检测多中心方法学比对研究，为进一步优化重症肌无力抗体检测提供基于核心证据，为建立新国际推荐奠定基础。

图1 中华医学会神经病学分会神经免疫学组2021年第三次工作及学术会议主要讲者

（A郝洪军教授、B施福东教授、C高峰教授（线上参会）、D李治国博士）

为了制定我国神经免疫疫病的试验室诊断指南，以及针对市场上抗体检测项目混乱，大套餐等情况，本次会议学组进行了全国专家问卷调查（图2-5）。针对自身免疫性脑炎，调查结果显示各个委员的意见基本一致，都表达了对自免脑的抗体检测大套餐的反对（图2-4 自身免疫性脑炎实验室诊断相关问题专家共识调查问卷）。截然相反的，与会专家对重症肌无力疾病自身抗体检测内容和检测方法学选择具有高度一致的共识，认为：1）应将重症肌无力特异性自身抗体检测作为首选辅助检测手段；2）抗AChR或MuSK抗体作为重症肌无力疾病特异性实验室诊断指标；3）抗AChR或MuSK抗体的检测推荐使用特异性和灵敏性高的CBA法进行诊断定性和抗体半定量分析等（图5 重症肌无力实验室诊断相关问题专家共识调查问卷）。

中华医学会神经病学分会神经免疫学组第三次工作会议讨论环节百家争鸣，集思广益，讨论了中枢脱髓鞘、自身免疫性脑炎及重症肌无力实验室诊断指南初稿。最后，管阳太教授和冯慧宇教授进行了会议总结，指出本次会议对推进我国神经免疫疾病实验室诊断发展具有重要意义，肯定了继续努力开展神免疾病自身抗体检测全国多中心方法学比对的必要性，神经免疫学组要促进依靠中国人的数据形成诊断国际指南；同时认为我国在重症肌无力自身抗体CBA法检测技术的积累，极有可能率先突破国外卡脖子技术的瓶颈，建立中国在重症肌无力疾病抗体检测上的国际主导优势。