关注 | 美国CDC对新型冠状病毒体外诊断试剂检测结果潜在偏差问题作出说明

互推小编 2024-03-12

编译：沈阳药科大学药品监管科学研究院

2020年2月4日，美国疾病控制与预防中心(CDC)研发的检测2019新型冠状病毒（2019-nCoV）的实验室检测试剂盒获得美国FDA的紧急授权（EUA）。虽未通过美国FDA的审批或批准，但是试剂盒的分发和使用符合FDA发布紧急授权要求。

该试剂盒被命名为CDC 2019-nCoV实时RT-PCR诊断面板，用于新型冠状病毒肺炎核酸检测。检测程序包括使用FDA授权的提取方法/仪器从人体样本中提取和纯化核酸，然后进行实时逆转录-聚合酶链反应（即RNA被逆转录成cDNA，利用引物扩增，然后用特定的探针检测）。

新型冠状病毒肺炎诊断试剂作为是新型冠状病毒肺炎确诊的重要手段，其检测结果能否可信？阴性结果就代表没有感染新型冠状病毒吗？为什么检测结果呈阴性，过几天再次检测呈阳性?

美国CDC对新型冠状病毒体外诊断试剂检测结果潜在偏差问题作出说明，阴性结果不能排除2019-nCoV感染，并不意味着检测结果不精准。

对检测结果解读作出明确说明

针对新型冠状病毒肺炎诊断试剂的检测结果，美国CDC在新型冠状病毒体外诊断试剂盒使用说明中明确说明：

1）阳性结果表明存在2019-nCoV的阳性感染，但不排除细菌感染或与其他病毒合并感染的可能性。被检测到的病原体可能不是疾病的确切原因。

2）阴性结果也不排除2019-nCoV感染，不应作为治疗或其他患者管理决策的唯一依据。阴性结果必须与临床观察、患者病史和流行病学信息相结合。

对检测结果可能出现的不确定性进行说明

Dr. Nancy Messonnier（美国CDC的国家呼吸系统疾病中心主任）在2月3日CDC电话采访中指出：“这是一种精准的检测。阴性检测结果很可能意味着一个人没有被感染。同时，这也可能意味着感染还没有发展到可以被检测到的程度。这是一种新型病毒，确定某人是否感染这种新型病毒的最佳时间和正确的样本类型尚不确定。”同时，RNA病毒遗传变异性强。虽然CDC已设计用于病毒基因序列保守区域的rRT-PCR检测，但如果病毒在rRT-PCR目标区域中发生突变，可能无法检测到2019-nCoV或可能难以预测，从而导致检测性能下降和可能的假阴性结果。因此，CDC建议同一患者检测多个样本，阴性结果必须与临床观察、患者病史和流行病学信息相结合。

如何能增加检测结果的准确性，为临床诊断提供有效支持？根据美国CDC新型冠状病毒体外诊断试剂盒使用说明以及授权书的相关内容，该试剂盒检测应具备以下几个限定条件：

1、限定实验室条件

仅限于授权实验室可进行检测。授权实验室是美国CDC指定的、经过1988年临床实验室促进法案修正案（CLIA）认证的、可进行高复杂性检测的合格实验室。授权实验室应根据试剂盒使用说明所述进行检测。不允许偏离授权程序，授权程序包括授权的RT-PCR仪器、提取方法、临床样本类型、对照材料、其他辅助试剂和执行CDC 2019-nCoV实时RT-PCR诊断面板所需的授权材料(具体内容见：本公众号“美国FDA紧急授权首个新型冠状病毒实时RT-PCR诊断检测试剂”)。

2、限定检测仪器版本

检测所需仪器为美国应用生物系统公司(Applied Biosystems)生产的7500 Fast Dx 实时PCR仪，软件版本为SDS version 1.4或其他授权的仪器以及软件版本。

3、限定操作程序

临床样本收集、处理、储存条件

（一）收集样本：

A.下呼吸道：支气管肺泡灌洗，气管吸出物。收集2-3毫升到无菌、防漏、螺旋盖的痰液收集杯或无菌干燥容器中；痰。让病人用清水漱口，然后将深度咳嗽的痰液直接放入无菌的、防漏的螺旋盖痰液收集杯或无菌的干燥容器中。

B.上呼吸道：鼻咽拭子（将拭子平行于上颚插入鼻孔，放在适当的位置几秒钟以吸收分泌物，用相同的拭子擦拭两个鼻咽区域）和口咽拭子（如咽喉拭子，拭子在咽后，避开舌头）。只使用带有塑料轴的合成纤维拭子。不要使用海藻酸钙拭子或木棒拭子，因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制PCR检测的物质。取样后，立即将拭子放入含有2-3ml病毒运送营养液的无菌试管中。鼻咽和口咽样本应保存在单独的小瓶中；鼻咽冲洗/吸引物或鼻吸引物，收集2-3毫升到无菌、防漏、螺旋盖的痰液收集杯或无菌干燥容器中。

C.血清：儿童和成人，收集1管(5-10毫升)全血在血清分离器管；婴儿至少需要1毫升的全血。如果可能，收集1毫升的血清分离器管。血清分离管应直立存放至少30分钟，然后以1000-1300相对离心力(RCF)离心10分钟，取出血清，置于单独的无菌管中(如冷冻管)运输。

（二）运输样本：

样本必须按照当前的国际航空运输协会(IATA)危险品规则进行包装、运送和运输。在运送有潜在的2019-nCoV样本时，应遵守UN 3373生物物质B类的装运规则。将样本保存在2-8°C，用冰连夜袋运送至CDC。如果样本在-70°C或更低的温度下冷冻，用冰袋连夜运送到CDC。

（三）储存样本：

样本收集后可在2-8℃保存72小时；如果核酸提取步骤可能会有延迟，应将样本保存在-70℃或更低温度；提取的核酸应储存在-70℃或更低的温度。

实验室样本处理

应按照安全的实验室程序处理所有的样本。实验室工作人员在处理具有潜在传染性的样本时，应穿戴适当的个人防护装备(PPE)，包括一次性手套、实验室外套/长袍和护目镜。任何可能产生细小颗粒气溶胶的程序（例如，在敞口管中涡旋或超声处理样本）应在II级生物安全柜（BSC）中进行。离心时应使用适当的物理密封设备（例如，离心机安全桶；密封的转子）。理想情况下，应在生物安全柜中装载和卸载转子和铲斗。在生物安全柜之外尽量执行那些风险最小的程序。可以使用标准二级生物安全实验室（BSL-2）工作规范在BSL-2设施中进行相关活动。更多详情，请参阅美国发布CDC处理与2019-nCoV相关样本的实验室生物安全临时指南[1]。

4、限定操作人员资格

所有使用者、分析人员和任何报告诊断结果的人员都应该接受相关的培训，以执行此检测过程。他们需证明自己有能力进行检测，并在独立进行检测前可以解释可能出现的结果。CDC病毒性疾病科（Division of Viral Diseases）只向那些成功完成由CDC指导员或其指定人员提供培训的使用者分发试剂。

5、限定检测报告处理措施