论文推荐 || 蓝莓果实多酚提取物的抗炎活性研究

互推小编 2023-06-08

姚蓓等南京林业大学学报

“蓝莓又名越橘、红豆果、蓝浆果,为杜鹃花科越橘属 (Vaccinium L. ) 多年生常绿或落叶灌木，是第 3 代果树的典型代表。英国权威营养学家将蓝莓列为 15 种健康食品之首，联合国粮农组织也将蓝莓列入人类五大健康食品(苹果、杏、香蕉、黑莓、蓝莓)之一，蓝莓还有“水果皇后”“美瞳之果”的美称。蓝莓果实中除了含有常见的糖、有机酸、蛋白质、纤维素、矿物质、维生素等营养成分，还含有酚酸类、黄酮类等具有生理功能的营养保健性化学成分，以及抗氧化、抗炎、预防心血管疾病和保护视力等多种生理活性。 ”

▲：巴尔德温花

▲：巴尔德温果

炎症是机体对于刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍等。炎症是众多分子信号通路构成的复杂网状体系，是由多种分子机制介导的复杂过程，其中包括诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和环氧合酶 (COX-2) 两个重要的分子机制。一氧化氮 (NO) 是细胞间信息传递的重要调节因子，并具有介导细胞免疫和炎症毒性的功能，它的过量生成与炎症的诱发密切相关，能够影响炎症反应的进程。外源抗炎因子可以通过抑制一氧化氮合酶 (iNOS) 基因和环氧合酶-2 (COX-2) 基因的表达，直接或间接控制 NO 生成量和氧化应激，维持 NO 量和酶活性的正常生理水平，在抑制致炎细胞因子表达的同时提高抗炎介质表达，进而发挥抗炎作用。研究表明，巨噬细胞在外部细菌毒素如脂多糖 (LPS,Lipopolysaccharides) 等刺激时可诱导 iNOS 基因和 COX-2 基因的高度表达，同时使处于正常水平的 NO 过量分泌,致使炎症发作。

本期推荐论文采用 RAW264. 7 巨噬细胞炎症模型,考察了 5 个蓝莓品种果实多酚提取物对 COX-2 和iNOS 基因表达及 NO 分泌量的影响,初步探讨了蓝莓多酚的抗炎作用及其机理。

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题目

蓝莓果实多酚提取物的抗炎活性研究

基金项目

江苏现代农业产业技术体系建设项目；江苏省农业科技自主创新资金项目

作者

姚　蓓1 ，赵慧芳1 ，吴文龙1∗ ，李维林1,2*

作者单位

1. 江苏省中国科学院植物研究所；2.南京林业大学，南方现代林业协同创新中心

关键词

蓝莓；多酚；抗炎活性；一氧化氮合酶基因；环氧合酶-2 基因

引文格式

[1]姚蓓,赵慧芳,吴文龙,等.蓝莓果实多酚提取物的抗炎活性研究[J].南京林业大学学报(自然科学版),2019,43(03):152-156.DOI:10.3969/ j.issn.1000-2006.201805013
YAO B,ZHAO H F,WU W L,et al.Anti-inflammatory activity of polyphenol extracts from blueberry fruit[J].Journal of Nanjing Forestry University(Natural Sciences Edition),2019,43(03):152-156.

1.目的

探索蓝莓果实多酚提取物的抗炎作用及其机理。

巨蓝花

巨蓝果

园蓝花

园蓝果

2.方法

采用 RAW264. 7 巨噬细胞炎症模型，考察蓝莓果实多酚提取物对一氧化氮合酶 (iNOS) 基因和环氧合酶-2 (COX-2) 基因表达以及 NO 分泌量的影响。

2.1 多酚提取物对 LPS 诱导的 RAW264. 7 巨噬细胞基因表达的影响

PCR 反应：将 cDNA 样品稀释 8 倍作为模板上机检测，合格后用于 PCR 反应。GAPDH 内参基因、iNOS、COX-2 目的基因引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，序列见表 1。

▼表 1　内参及目的基因引物序列

3.结果

蓝莓果实多酚提取物能抑制脂多糖 (LPS) 诱导的巨噬细胞中 NO 的分泌，且随着浓度的增加 NO 分泌量逐渐降低；蓝莓果实多酚提取物下调了 iNOS 和 COX-2 基因的表达；参试的 5 个蓝莓品种果实多酚提取物的抗炎活性有差异。

安娜花

安娜果

灿烂花

灿烂果

3.1 蓝莓果实多酚提取物对 RAW264. 7 巨噬细胞 NO 分泌量的影响

用 LPS 诱导 RAW264. 7 巨噬细胞产生炎症反应，分别加入质量浓度为 0、5、10、50 μg/ mL 的蓝莓果实多酚提取物，测定细胞 NO 含量,结果见图 1。可以看出，空白对照组巨噬细胞的 NO 分泌量接近于零，阳性对照组 NO 的分泌量最大，说明造模成功，即 LPS 成功诱导了巨噬细胞炎症。药物组巨噬细胞的 NO 分泌量低于阳性对照组，并随着药物添加浓度的增加 NO 的分泌量逐渐降低，在质量浓度为 50 μg/ mL 时达到显著差异水平，说明蓝莓果实多酚提取物能够抑制 NO 的分泌，具有抗炎作用。5 个蓝莓品种表现出了相同的变化趋势，低浓度下品种间差异不显著，高浓度下‘安娜’蓝莓多酚提取物抑制细胞 NO 分泌的作用最强，其次是‘巴尔德温’。

▲图 1　蓝莓果实多酚提取物对 RAW264. 7细胞 NO 分泌量的影响

3.2 内参基因和目的基因扩增片段的检测

以反转录获得的 7 个处理 (包括空白对照组 1 个、阳性对照组 1 个、药物组 5 个) 的 cDNA 为模板进行普通 PCR 扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，结果如图 2 所示。由图 2 可见，在 200 bp 左右处存在较亮的特异性条带，与内参基因和目的基因引物设计时预测的片段大小基本一致，说明扩增反应具有较高的专一性，设计的引物可以用于荧光定量 PCR 实验。

▲图 2　目的基因和内参基因 PCR 产物的电泳图

3.3 蓝莓果实多酚提取物对 RAW264. 7 巨噬细胞 iNOS、COX-2 基因表达的影响

考察了 5 个不同品种蓝莓果实多酚提取物在 50 μg/ mL 添加浓度下巨噬细胞的 iNOS 和 COX-2 基因的表达情况，结果如图 3 所示。可以看出，空白对照组巨噬细胞的 iNOS 和 COX-2 基因表达量几乎处于零水平；而在 LPS 诱导条件下 (阳性对照组) ，iNOS 和 COX-2 基因表达量急剧上升，其中 COX-2 基因的表达量较 iNOS 基因的表达量高;在药物组，添加蓝莓果实多酚提取物后，iNOS 和 COX-2 基因表达量与阳性对照相比均有所降低，其中对 iNOS 基因表达抑制作用最为明显的是‘巴尔德温’，对 COX-2 基因表达抑制作用最为明显的是‘园蓝’。