体外培养SD大鼠关节软骨细胞原代至第3代的形态学特点

互推小编 2023-05-19

文题释义：

胶原酶(collagenase)：是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

软骨细胞：关节软骨组织中的唯一细胞成分为软骨细胞，软骨细胞主要起到维持关节软骨组织内环境稳态的作用。软骨细胞位于软骨基质内的软骨陷窝中，在其周围有一层由胶原及蛋白聚糖等大分子构成的染色深的软骨囊，构成细胞外基质的重要成分为胶原，其中II型胶原约占90%-95%。关节软骨组织损伤后自我修复能力极差的原因是其组织内无神经、血管，软骨细胞增值能力有限。

细胞培养：是指在生物体外模拟体内环境(无菌、温度、酸碱度和营养条件等)，使分离出的细胞在其中生存、生长、繁殖并维持其主要结构和功能的技术。

背景：常用的获得软骨细胞的方法有机械-酶消化法、链霉蛋白酶和胶原酶序贯消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶序贯消化法以及单纯Ⅱ型胶原蛋白酶消化法。

目的：探讨SD大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原酶体外分离、提取、鉴定方法，观察原代至第3代软骨细胞的形态学特点。

方法：课题组采用一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)体外分离、提取、培养SD大鼠膝关节软骨细胞并进行传代培养，进而构建其体外培养体系。使用细胞增殖实验、倒置相差显微镜观察细胞组织学形态；甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原与蛋白聚糖免疫荧光染色等方法进行细胞性状鉴定。实验经大连大学附属中山医院伦理委员会批准。

结果与结论：①镜下观察与细胞增殖实验均显示第2，3代细胞形态、增殖能力最佳，后逐渐退化；②甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原与蛋白聚糖免疫荧光染色等组织学检测显示，第3代体外培养软骨细胞状态功能良好；③结果表明，一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)能够成功地从SD大鼠膝关节标本中分离出软骨细胞并且可以进行传代培养；体外培养3代后软骨细胞去分化特性逐渐增强，第3代体外培养软骨细胞性状良好，可用于实验研究。

https://orcid.org/0000-0001-8611-0558 (赵德伟)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 软骨细胞, 酶消化法, 细胞培养, 大鼠, 实验

引用本文：杨帆, 刘保一, 刘家河, 杨佳慧, 覃开蓉, 赵德伟. 体外培养SD大鼠关节软骨细胞原代至第3代的形态学特点[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2161-2165.

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