NY/T 1651-2008 蔬菜及制品中番茄红素的测定高效液相色谱法

互推小编 2023-11-08

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 1651-2008

蔬菜及制品中番茄红素的测定

高效液相色谱法

Determination of lycopene in vegetables and derived products-HPLC

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。

本标准起草单位：农业部蔬菜品质监督检验测试中心(北京)、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。

本标准主要起草人：刘肃、王敏、靳松、邵华。

1范围

本标准规定了用高效液相色谱仪测定蔬菜及制品中番茄红素的方法。

本标准适用于番茄、胡萝卜、番茄汁、番茄酱等蔬菜及制品中番茄红素的测定。

本方法的线性范围为10 ng~1 000 ng。

本方法的检出限为0.13 mg/kg。

2原理

蔬菜及制品中的番茄红素经丙酮-石油醚混合溶液[ψ(C3H6O+C6H14)=1+1]提取后，用石油醚液萃取，再用二氯甲烷定容，最后用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长472 nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

3试剂

除非另有说明，在分析中至少使用色谱纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水。所有有机试剂每1 000 mL中加入1g 2,6-二叔丁基对甲酚(3.1)。

3.1 2,6-二叔丁基对甲酚，分析纯。

3.2丙酮(C3H6O)，分析纯。

3.3石油醚(C6H14)，60℃~90℃，分析纯。

3.4丙酮-石油醚混合溶液[ψ(C3H6O+C6H4)=1+1]。

3.5 甲醇(CH3OH)。

3.6乙腈(CH3CN)。

3.7二氯甲烷(CH2Cl2)。

3.8甲醇-乙腈-二氯甲烷混合溶液[ψ(CH3OH+CH3CN+CH2Cl2)=20+75+5]

3.9无水硫酸钠(Na2SO4)，分析纯。

3.10番茄红素标准品，纯度≥95%。

3.11番茄红素标准贮备液：准确称取0. 001 00 g番茄红素标准品，用二氯甲烷(3.7)溶解，转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，得到质量浓度为100mg/L的番茄红素标准贮备液。分装于三个样品瓶中，应避免光照和高温，贮于-20℃~-16℃冰柜中备用。

3.12番茄红素标准工作溶液：使用时番茄红素标准贮备液(3.11)用二氯甲烷(3.7)稀释得到质量浓度为20mg/L和5mg/L的番茄红素标准工作溶液。

4仪器

4.1高效液相色谱仪，配紫外检测器。

4.2 分析天平，感量0.01 mg和0.01 g。

4.3 砂心漏斗，G4。

4.4分液漏斗，250 mL。

4.5旋转蒸发仪。

4.6氮吹仪。

4.7组织捣碎机。

5试样制备

蔬菜样品洗净后去蒂、去皮，若有籽去籽，按照四分法取样后放入食品加工机中捣碎成匀浆。将匀浆试样放入聚乙烯瓶中于-20℃~-16℃条件下保存。

蔬菜制品密封好后置于-20℃~-16℃条件下保存。

6分析步骤

6.1提取

将试样充分混匀，蔬菜或汁类制品称取试样5 g，酱类制品称取试样2 g，精确至0.01 g，置于150 mL烧杯中，加入适量丙酮-石油醚混合溶液(3.4)直至完全淹没试样，用玻璃棒搅拌后静置，使番茄红素充分溶解，然后移入砂心漏斗(4.3)中真空抽滤，滤液收集于试管中。重复上述步骤直至将试样洗至无色。

6.2净化

6.2.1蔬菜和汁类制品

将全部滤液转移至分液漏斗中，静置分层，上层有机相通过装有无水硫酸钠(3.9)的玻璃漏斗后收集至圆底烧瓶中，下层水相继续用20mL石油醚(3.3)萃取，继续收集有机相，无水硫酸钠用石油醚(3.3)洗至无色并收集滤液。全部有机相在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00 mL二氯甲烷(3.7)溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。

6.2.2 酱类制品

将全部滤液转移至圆底烧瓶中在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00 mL二氯甲烷(3.7)溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。

6.3色谱参考条件

检测波长：472nm。

色谱柱：C18不锈钢柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者。

流动相：甲醇-乙腈-二氯甲烷混合溶液[ψ(CH3OH+CH3CN+CH2Cl2)=20+75+5]。

流速：1.0mL/min。

进样体积：10μL。

6.4 测定

分别将标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

6.5 空白测定

除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。