变异法氏囊病病毒和禽腺病毒血清型 4 共同感染增加鸡的死亡率并降低免疫反应

感染鸡的临床评分和存活率。用变体 IBDV-ZD-2018-1 和/或 FAdV-4-HB1501 攻击的鸡的临床评分 ( A ) 和存活百分比 ( B )。

不同组的组织病理学变化和平均病变评分。 A对照鸡的苏木精和伊红染色的肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊、胸腺和十二指肠切片的代表性图像（分别为 a–f）、仅 FAdV（分别为 g–l）、仅 IBDV（分别） m–r，分别），或 IBDV-FAdV 共感染（分别，s–x）组在 5 dpi 时与 FAdV-4-HB1501 组。放大倍数：×400。B 5 dpi 时这些器官的平均病变评分；a–c没有共同上标的条形有显着差异 ( p < 0.05)。

组织中的病毒 DNA 检测

图3显示了仅FAdV和IBDV-FAdV共感染组的不同组织中的病毒载量 。这两组肝脏中的 FAdV 基因组拷贝数在 FAdV-4-HB1501 5 dpi 时达到峰值，并且 IBDV-FAdV 共感染组的病毒载量高于仅 FAdV 组（图 3 A） ）。FAdV-4-HB1501 联合感染组的脾脏和肾脏中的病毒载量在 5 dpi 时达到峰值，而在 FAdV 组中，病毒载量在 7 dpi 时达到最大值。IBDV-FAdV 共感染组的病毒拷贝数高于仅 FAdV 组，在 5 dpi 时具有统计学显着性差异（图 3 B 和 C；p < 0.05）。两组胸腺中的病毒载量逐渐增加，并在FAdV-4-HB1501 7 dpi时达到峰值，并且IBDV-FAdV共感染组的病毒拷贝数趋势高于仅FAdV组，但这种差异未能达到统计显着性（图 3D）。仅使用 FAdV 的组和使用 FAdV-4-HB1501 的 IBDV-FAdV 联合感染组的 BF 中的最大病毒载量分别在 1 dpi 和 3 dpi 时达到峰值（图 3 E ）。最后，在大多数时间点，IBDV-FAdV 共感染组的 BF 样本中的病毒载量高于仅 FAdV 组的病毒载量。

检测病毒脱落

检查泄殖腔 FAdV 脱落情况，结果如图3 F所示。 仅使用 FAdV 和 IBDV-FAdV 共感染组的病毒脱落均在使用 FAdV-4-HB1501 后 5 dpi 时达到峰值，之后下降。在大多数时间点，IBDV-FAdV 混合感染组鸡的病毒排出水平显着高于仅 FAdV 组，这与这两组组织样本中测量的病毒载量一致（图 3 A） –E）。

细胞因子 mRNA 表达水平

为了检测 IBDV 和 FAdV 共感染诱导的细胞因子反应，使用 qRT-PCR 检测脾脏中细胞因子 mRNA 的表达水平。注射后 1 至 5 d，仅使用 FAdV 组的 IL-6 mRNA 表达水平显着高于使用 FAdV-4-HB1501 的对照组（p < 0.05），而仅使用 FAdV 组的 IL-6 mRNA 表达水平显着高于使用 FAdV-4-HB1501 的对照组（p < 0.05 ） 。IBDV-FAdV 共感染组在 5 dpi 时与 FAdV-4-HB1501 对照组有显着差异（p < 0.05）。此外，在使用 FAdV-4-HB1501 后 1 dpi 和 3 dpi 时，仅 FAdV 组中 IL-6 的 mRNA 表达水平显着高于 IBDV-FAdV 共感染组（图 4 A； p < 0.05 ） 。

The IFN-α mRNA expression level in the FAdV-only group trended higher than that in the control group at 3 dpi, but this difference failed to reach statistical significance. These levels in the IBDV-FAdV co-infection group were lower than those in the control group at all sampling timepoints. Notably, the IFN-α mRNA expression level in the FAdV-only group was significantly higher than that in the IBDV-FAdV co-infection group at 3 dpi with FAdV-4-HB1501 (Figure 4C; p < 0.05). The trend of IFN-γ mRNA expression levels in the infected groups was consistent with that of the IL-6 mRNA expression levels (Figure 4D). These results demonstrate that the cytokine response in the IBDV-FAdV co-infection group was delayed in comparison with the response in the FAdV-only group.

生化指标水平

生化指标结果见图 5。IBDV-FAdV 合并感染组的血清 ALT 水平在使用 FAdV-4-HB1501 后 5 d 时达到峰值，并且显着高于该时间点其他三组的水平（图 5 A；p < 0.05 ） 。FAdV-4-HB1501 感染后 5 dpi 时，IBDV-FAdV 联合感染组的血清 AST 水平显着高于其他三组（图 5 B；p < 0.05）。在使用 FAdV-4-HB1501 后 7 dpi 时，IBDV-FAdV 共感染组的血清 LDH 水平显着高于其他三组（图 5 C；p < 0.05）。一致地，在 FAdV-4-HB1501 感染后 5 至 7 dpi，IBDV-FAdV 联合感染组的血清尿素水平显着高于其他三组（图 5D；p < 0.05 ） 。

抗体反应

图6显示了感染组共感染后7天鸡中的FAdV和IBDV特异性抗体反应 。仅 FAdV 组中的 8 只鸡中有 4 只具有阳性抗 FAdV 抗体反应，而 IBDV-FAdV 共感染组中的所有鸡均缺乏可检测到的抗 FAdV 抗体反应；与仅使用 FAdV 的组相比，这种差异具有统计学意义（图 6 A）。仅感染IBDV组的6/10只鸡和IBDV-FAdV共感染组的4/6只鸡中抗IBDV抗体滴度呈阳性。IBDV-FAdV 共感染组的这种抗体反应趋势低于仅 IBDV 组，但这种差异未能达到统计学显着性（图 6 ）B）。正如预期的那样，对照组的鸡缺乏可检测到的针对 FAdV 或 IBDV 的抗体反应。